最经典“常见问题解答（FAQ）
最经典“常见问题解答（FAQ）”：
1、lip2000和lip3000的区别在哪？
- Lip2000：单组份，通用性强，质粒DNA和siRNA 可以共转染，但用量
比例大。优点的是经济实惠，缺点是对难转染的细胞效果一般
- Lip3000：lip2000的升级款，加了DNA孵育试剂，双组分，在难转染
的细胞面前也有相对较高的效率，毒性也比2000更低，用量也更少。 缺
点是主要针对DNA质粒转染，在共转染和RNA领域效果一般
2、转染过程中需不需要换液？（也就是能否“偷懒”）
- 转染过程中涉及两个阶段的换液操作
- 一是在转染前需要提前把营养液换成无血清培养基（且无抗生素），其
目的是更好的转染效果，避免血清及抗生素的干扰
- 二是在转染后 6小时需要把转染的工作液换掉，目的是防止转染试剂毒性
长期影响。这次换液，有条件的话肯定是换液效果会更好，达到最佳的
转染效果和降低对细胞的毒性
- 具体换不换液，我们建议是分细胞：常规细胞好转染的可以不换液，如
果相对难转染的细胞，换液是必须的，以便提升转染效率
3、脂质体加在PBS、培养基或其他液体里面？
- 转染过程中血清会影响脂质体和核酸复合物的形成！不能有血清，
此时细胞是最脆弱最需要营养
- 最好是optimem减血清培养基(MF988)，它是血清替代营养液，
可以保证无血清的情况下，又能保证转染过程的营养供给
- 常规培养基可以
- 但PBS不建议，PBS是没有营养的
4、质粒和脂质体用量比例怎么换算?
- 初次摸索条件，推荐：DNA和转染试剂比例为1:2-1:3
- 细胞实验原则上没有固定比例，和细胞类别和细胞本身状态影响很大
- 建议客户每次做实验前都参照说明书用量都做个梯度，以实际最佳效率
逐渐优化，尽量不要用按部就班的比例和用量的
5、慢病毒转染用lip2000可以吗?
- 转染是复杂的过程，与转染试剂 、病毒大小和类别、还有细胞的类别等
关系密切，不能说都可以，只能说像腺病毒 293 等常规的是可以的
- 如果之前用过进口的lip2000，那我们的也可以，因为作用原理是一样的，
可以直接替换
- 或者用过其他品牌的脂质体的，成功转染，那我们一般也没有问题
- 但如果之前没做过这方面相关实验，那只能说让客户试下，摸索条件
6、lip2000同时转染DNA质粒和miRNA，可以吗?
- Lip2000可同时转DNA和siRNA，两者加起来的量和说明书量一
样即可（很多品牌不支持共转染，澳门最新游戏网站平台大全游戏网站的可以！）
- Lip2000同时转DNA和miRNA 效果的话一般
- 如果质粒多的情况下，可以分开转染
- 如果质粒量少的情况下，可以把他们混合共转染，总量不超过实
验用量就可以
7、lip3000对难转细胞，如何优化?
- 转染试剂和质粒用量建议提前做个梯度预实验，原则上细胞状态
允许的情况下，转染试剂用量越高效率也会随着提高
- 选细胞生长状态最好，密度最佳（90-95%）的时候转染
- 期间最好不要加血清和抗生素
- 转染时间控制在6小时左右
- 质粒提前纯化好，强烈推荐澳门最新游戏网站平台大全游戏网站无内毒素质粒大提（MF985）
8、lipRNAmax 转 siRNA没有作用，为何？如何优化?
RNA转染不成功的因素比较多,从以下几个方面找原因并优化；
- 首先蛋白水平检测要在48-72小时内,多测几个时间点,时间太短蛋
白水平可能会出现检测不准的情况
- RNA的有效性也要排查下,比如转染过程中RNA降解,RNA浓度不
够,引物设计位置尽量不要在同侧,干扰靶点等
- 以上都没问题，再通过优化转染试剂用量。最好做先做预实验,事
先用荧光转染先验证下能否成功转染,同时优化下最佳用量比例。
同时转染过程中尽量不要加抗生素和血清