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M5 Yeast Protein Extraction Kit

使用说明书

产品名称                     单位        货号

M5 Yeast Protein Extraction Kit     50T      MF187-02

【STORAGE】

常温下运输，收到后，将等渗液和低渗液在4℃保存，蜗牛酶和PMSF在-20℃的冰箱中保存，保质期两年。

【产品简介】

酵母蛋白提取试剂盒采用EDTA，山梨醇和蜗牛酶，蛋白酶抑制剂，蜗牛酶在合适的等渗体系中消化酵母的细胞壁，在用等渗液冲洗后，用含有蛋白酶抑制剂和温和去污剂的低渗缓冲液进行反复冻溶，促进细胞破裂，从而释放蛋白质，可以应用酵母蛋白和重组胞内蛋白的活性分析，western blot、SDS-PAGE、2D和免疫共沉淀等蛋白质电泳以及免疫学实验,每次可以处理50mg的湿重酵母，可以使用50次。

如果酵母蛋白提取后续实验为SDS-PAGE等变性蛋白电泳及免疫学实验，亦可通过裂解液（组分II）处理后加入SDS-PAGE上样缓冲液直接制备蛋白样品。

【产品组份 I】

        50T

等渗液                   75 mL

低渗液                   25 mL

蜗牛酶                  0.25 mL

PMSF                  0.25 mL

【产品组份 II】

           50T

裂解液                      10 mL

中和液                     0.4 mL

5xSDS 上样缓冲液           1 mL

【注意事项】

按照每50 mg湿重加500μL的等渗液和5μL的蜗牛酶，菌体的量不能够过多,否则会使的菌体裂解不充分。

裂解后的酵母菌蛋白液,应在-20℃的冰箱中保存。

在跑电泳时，由于蜗牛酶已经被冲洗，所以可能产生与蜗牛酶相关的几个条带，一般不会产生。

溶液使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。

【操作步骤 I】

将酵母在28-30℃的环境中培养到OD₆₀₀=1.0左右。8000 rpm（5000g) 离心1 min，收集菌体并称量菌体的湿重。

以每50mg湿重加500μL等渗液，5 μL蜗牛酶和1 μL的巯基乙醇，枪头吹吸或者涡旋震荡，将菌体悬浮。

30℃水浴60 min，5000 rpm(2500g) 离心1min，去上清，收集沉淀。

用500μL等渗液重悬，再5000 rpm(2500g) 离心1 min，去上清，收集沉淀，重复洗涤一次。

加人500μL 低渗液(使用前，在500μL低渗液中加5 μL PMSF)重悬，再放入-20℃冰箱中冷冻30 min，室温溶解。再放入-20℃冰箱中冷冻30 min，室温溶解。

裂解后的溶液12000 rpm (12830g) 离心5 min后，取上清可以用于实验。

【操作步骤 II】

将酵母在28-30℃的环境中培养到OD₆₀₀=1.0左右, 取2-5 ml 培养物，8000 rpm（5000g) 离心1 min，收集菌体， 尽量将培养基上清去除干净。

加入200 μL裂解液和4 μL的巯基乙醇，枪头轻轻吹吸将菌体悬浮。

放入金属浴，96 加热 10 min.

加入5 μL中和液，震荡混匀。

12000 rpm 离心5 min后取20 μL上清加入5 μL 5xSDS 上样缓冲液混匀，即可用于蛋白电泳 （可根据情况梯度上样确定最佳上样体积， 如 3 μL, 6 μL, 9 μL ）

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。